间接法1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,南京生化试剂盒,每孔加0.1ml,4℃过夜;2.次日洗涤3次;3.加一定稀释的待检样品(未知)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,生化试剂盒厂商,洗涤;4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二(抗)0.1ml;5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;6.’后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。
加酶标:于各反应孔中,生化试剂盒报价,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。
37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,生化试剂盒供应商,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“ ”、“-”号表示。
也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应
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